استفاده از روشی کارآمد برای جداسازی اسپرم‌های با تحرک کم و زیاد در منی تازه تیمار شده با Resiquimod (R848) در نریان، باهدف جداسازی اسپرم‌های حامل کروموزوم X از Y

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان
1 1. دانشجوی دستیاری رشته مامایی و بیماری‌های تولید مثل دام، گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد- ایران
2 گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد- ایران
3 پژوهشکده فناوری جنین دام، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد- ایران
4 مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، پژوهشکده علوم پایه سلامت، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد- ایران
10.22034/ijvcs.2025.15266.1143
چکیده
هدف از مطالعه حاضر تنظیم و بهینه‌سازی روشی کارآمد برای جداسازی اسپرم‌های کم‌تحرک و پرتحرک تیمار شده با Resiquimod (R848) در اسب بود، با این هدف که بتوان از این روش در تولید اسپرم تعیین جنسیت شده در اسب استفاده کرد. در مطالعه حاضر، نمونه منی تازه از سه نریان متفاوت در سه تکرار اخذ شد.  برای تعداد 30 میلیون اسپرم، فرایند Swim-up در محیط HTF برای مدت‌زمان 30 دقیقه انجام شد. در پایان، 5 لایة مختلف، به ترتیب از بخش بالایی محیط به سمت پایین جداسازی شدند. چهار دز 06/0 (06/0D)، 12/0 (12/0D)، 16/0 (16/0D) و 24/0 (24/0D) میکرولیتر از Resiquimod با غلظت 3 میکرومولار مورد آزمایش قرار گرفتند و با گروه‌های کنترل بدون Resiquimod از نظر شاخص‌های مختلف حرکتی اسپرم مقایسه شدند. دزهای 12/0D ، 16/0D و 24/0D سبب کاهش معنی‌دار در شاخص‌های مرتبط با سرعت حرکت اسپرم در اغلب لایه‌های برداشت شده شدند (05/0P<). برای دز 16/0D، شاخص VSL در لایه‌های دوم و سوم (از بالا به پایین) در گروه درمان نسبت به کنترل افزایش معنی‌دار نشان داد (05/0P<). همچنین دز 16/0D سبب کاهش معنی‌دار در شاخص‌های سرعت حرکت اسپرم در 2 لایه پایینی شد (05/0P<). در بالاترین لایه برداشت شده در این دز، میزان VSL در گروه درمان بیش از گروه کنترل بود (05/0 P<) و 2 شاخص VCL و VAP اختلاف معنی‌داری بین گروه‌های کنترل و درمان نداشتند (05/0P>). در مجموع بهترین دز استفاده شده در این مطالعه که منطقی‌ترین تغییرات را در شاخص‌های حرکتی اسپرم در لایه‌های برداشت شده داشت دز 16/0D بود. 

کلیدواژه‌ها

موضوعات


عنوان مقاله English

Using an efficient method to separate sperms with low and high motility in fresh stallion semen treated with Resiquimod (R848), aiming to separate X and Y chromosome-bearing sperms

نویسندگان English

Seyed Pourya Hosseyni 1
Ali Kadivar 2
Naser Shams Esfandabadi 2
Najmeh Davoodian 3
Seyed Abbas Mirzaei 4
1 DVSc Student of Theriogenology, Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine Shahrekord University, Shahrekord- Iran.
2 Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Shahrekord University, Shahrekord- Iran
3 Research Institute of Animal Embryo Technology, Shahrekord University, Shahrekord- Iran
4 ellular and Molecular Research Center, Basic Health Sciences Institute, Shahrekord University of Medical Sciences, Shahrekord- Iran
چکیده English

The aim of the present study was to develop and optimize an efficient method to separate sperms with low and high motility in fresh stallion sperm treated with resiquimod (R848), aiming to separate X and Y chromosome-bearing sperms. Fresh semen samples were collected from three different stallions in triplicate. For 30 million sperm, swim-up was conducted in HTF medium for 30 minutes. Finally, five distinct layers were separated from the top to the bottom of the medium. Four doses of 0.06 (D0.06), 0.12 (D0.12), 0.16 (D0.16) and 0.24 (D0.24) µl of resiquimod at a concentration of 3 µM were tested and compared with control groups without resiquimod in terms of sperm motility parameters. Doses D0.12, D0.16, and D0.24 induced a significant reduction in sperm velocity-related indices across most harvested layers (P<0.05). For dose D0.16, VSL in the second and third layers (from top to bottom) of the treatment group showed a significant increase compared to the control group (P<0.05). Additionally, dose D0.16 caused a significant decrease in sperm motility indices in the two lower layers (P<0.05). At the highest harvested layer of this dose, the VSL in the treatment group was significantly higher than in the control group (P<0.05). However, the indices VCL and VAP showed no significant differences between the treatment and control groups (P>0.05). Overall, the best dose used in this study that produced the most reasonable changes in sperm motility indices in the harvested layers was D0.16.

کلیدواژه‌ها English

Stallion sperm
Swim-up
Resiquimod
Sperm motility indices